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AMPPD發光顯色試劑盒

簡介：

AMPPD是堿性磷酸酶的化學發光底物，在適宜的緩沖液中，隨著酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，后者發出強度很高的光信號，其發光的速度取決于堿磷酶的濃度。當堿磷酶偶合到雜交的探針時，便可以通過此系統檢測到雜交分子的存在量。乙醇胺可使光信號輸出更理想。AMPPD為1，2-二氧環已烷衍生物，它是一種生物化學領域中最新的超靈敏的堿性磷酸酶底物，其特點：反應速度快，在很短時間內提供正確可靠的結果。在它的分子結構中有兩個重要部分，一個是聯接苯環和金剛烷的二氧四節環，它可以斷裂并發射光子；另一個是磷酸根基團，它維持著整個分子結構的穩定。在通常情況下，這種化合物很穩定。但是，結果有堿性磷酸酶存在，Dioxetane Phosphate作為酶的底物會在酶的催化一脫去磷酸根基團，形成一個不穩定的中間體。這個中間體隨即自行分解（二氧四節環斷裂），同時發射光子。 AMPPD發光顯色試劑盒適用于PVDF膜，不推薦用于硝酸纖維素膜。

組成：

自備材料：

1、轉印了蛋白并已以抗體-酶復合物檢測過的PVDF膜

2、Tris鹽緩沖液(TBS)

3、透明的塑料保鮮膜

4、蒸餾水

操作步驟(僅供參考)：

臨用前，取適量的A1和A2，混合后獲得Dioxetane Buffer。

按AMPPD溶于Dioxetane Buffer, 配制AMPPD底物溶液即為AMPPD Dioxetane Buffer(發色發光顯跡液)，用于膜的染色。

取適量Dioxetane Buffer洗膜。

對于PVDF膜進行的堿性磷酸酶反應, 膜置于新鮮配制的AMPPD Dioxetane Buffer 作用。

將膜移入適量的AMPPD Dioxetane Buffer中，浸泡(AP反應)。

取出PVDF膜，滴干水分，將膜正面朝下放在一張透明的塑料保鮮膜上，向后折疊將膜包裹起來，成為不漏水的封閉體。

在暗房中，將膜正面朝下放在感光膠片上，曝光數秒至數小時。

如需要，在室溫下以適量的TBS洗膜。

將膜放入AMPPD Dioxetane Buffer。

10、用蒸餾水洗膜，終止反應。晾干后拍照留永久的記錄。

注意事項：

PVDF膜置于膠片上后，不要改變位置。

曝光時間應根據實驗情況，自行摸索。

配制好的AMPPD Dioxetane Buffer，應避光低溫保存。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 12個月有效。

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